เทคโนโลยีการขยายพันธุกรรม ซึ่งมักถูกอธิบายว่าเป็น "เครื่องถ่ายสําเนา" ของสาขาชีววิทยา มีบทบาทสําคัญในการวินิจฉัยโรค การวิจัยพันธุกรรม และสาขาวิทยาศาสตร์อื่นๆในหมู่เทคโนโลยีเหล่านี้, PCR และ qPCR ดูเหมือนจะคล้ายกันในสายตาแรก แต่ใช้ประโยชน์ที่แตกต่างกันและโดยเฉพาะอย่างยิ่งวิธีวิเคราะห์ข้อมูลของพวกเขา เพื่อช่วยนักวิจัยตัดสินใจอย่างรู้.
การปฏิกิริยาเชือกโพลิเมเรซ (PCR) เป็นเทคนิคในอาการทดลองในการขยายชิ้นส่วน DNA ที่เฉพาะเจาะจง โดยใช้โพลิเมเรซ DNAPCR ใช้หมุนเวียนการทําความร้อนและการทําความเย็นซ้ําๆ เพื่อเพิ่มลําดับ DNA เป้าหมายเป็นจํานวนมากหลักของเทคโนโลยีนี้อยู่ที่การออกแบบพิมพ์ ผสมผสานสั้น ๆ ที่เติมเต็มกับปลายของดีเอ็นเอเป้าหมายที่นํา DNA polymerase ไปจําลองภูมิภาคเฉพาะเจาะจง
การซ้ําหมุนเวียนเหล่านี้จะผลิตตัวสําเนาดีเอ็นเอเป็นล้านๆ ตัวอย่างอย่างอย่างรวดเร็ว ผลิตภัณฑ์พีซีเออร์มักถูกวิเคราะห์โดยใช้ไฟฟ้าหลอดเจลอะการอซ ซึ่งแยกชิ้นส่วนตามขนาด
QPCR (Quantitative PCR) หรือ PCR ในเวลาจริง เป็นเวอร์ชั่นที่ก้าวหน้าที่ติดตามการขยาย DNA ในเวลาจริง ทําให้สามารถกําหนดจํานวนได้อย่างแม่นยําเทคโนโลยีนี้ใช้เครื่องหมายแสงสว่าง ที่เชื่อมโยงกับปริมาณของดีเอ็นเอ.
การปรับปริมาณขึ้นอยู่กับค่าวงจรขั้นต่ํา (Ct) หมายเลขวงจรเมื่อแสงสว่างเกินพื้นหลัง ค่า Ct ที่ต่ํากว่าแสดงถึงความเข้มข้นระดับต้นของ DNA ที่สูงขึ้น วิธีการวิเคราะห์ประกอบด้วย:
PCR การถ่ายทอดกลับ (RT-PCR) เปลี่ยน RNA เป็น DNA ที่เติมเต็ม (cDNA) เพื่อการขยายต่อมา, ทําให้สามารถตรวจพบ RNA ได้. มี 2 แบบ:
การรวม RT-PCR กับ qPCR สร้าง RT-qPCR ซึ่งเป็นมาตรฐานทองคําสําหรับการจํานวน mRNA ในการศึกษาการแสดงพันธุกรรม
| ลักษณะ | PCR | qPCR |
|---|---|---|
| การติดตามในเวลาจริง | ไม่ (การวิเคราะห์จุดสิ้นสุด) | ใช่ |
| ปริมาณ | คุณภาพ/ครึ่งปริมาณ | ปริมาณ |
| วิธีการตรวจสอบ | อิเล็กทรอฟอเรซส์เจล | ฟลูเรสเซนซ์ |
| การใช้งาน | การคลอน, การเรียงลําดับ, การวินิจฉัย | การวิเคราะห์การแสดงออก, การกําหนดปริมาณของเชื้อโรค |
| การวิเคราะห์ข้อมูล | ความพร้อม/ความเข้มข้นของช่วง | ค่า Ct คอร์ฟมาตรฐาน |
| ความรู้สึก | ล่าง | สูงกว่า |
| การออกกําลัง | ล่าง | สูงกว่า |
| ค่าใช้จ่าย | ล่าง | สูงกว่า |
การวิเคราะห์ PCR รวมถึงการจดจําเจลง่าย ๆ ของแบนด์ DNA แสดงถึงการมีอยู่ / ไม่มีอยู่และความอุดมสมบูรณ์สัมพันธ์ผ่านความเข้มข้นของแบนด์ อย่างไรก็ตามวิธีการนี้ให้ความแม่นยําปริมาณจํากัด
การวิเคราะห์ qPCR ให้การกําหนดปริมาณที่ซับซ้อน ผ่านค่า Ct ซึ่งต้องการ:
สําหรับการปรับปริมาณสัมพันธ์ การคัดเลือกพันธุกรรมอ้างอิงที่เหมาะสมและการทําให้เป็นปกติเป็นสิ่งสําคัญ ในขณะที่การปรับปริมาณที่สมบูรณ์แบบต้องการเส้นโค้งมาตรฐานที่มีคุณภาพสูง
การเลือกระหว่าง PCR และ qPCR ขึ้นอยู่กับเป้าหมายการวิจัย:
PCR เพียงพอสําหรับการตรวจพบความอยู่/ไม่อยู่ ขณะที่ qPCR เป็นสิ่งจําเป็นสําหรับความต้องการการปรับปริมาณที่แม่นยํา
ผู้ติดต่อ: Ms. Lisa
Thai
