ชุดทดสอบอย่างรวดเร็วเพื่อความปลอดภัยของอาหารสำหรับการตรวจหา Escherichia coli EHEC ที่ทำให้เกิดภาวะเลือดออกในลำไส้ใหญ่ พร้อมน้ำยา PCR แบบเรียลไทม์ชนิดแห้งเยือกแข็ง ไม่ต้องใช้ห่วงโซ่ความเย็น

1. คำอธิบาย

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) เป็นกลุ่มของ E. coli สายพันธุ์ที่สามารถทำให้เกิดอาการท้องเสียและลำไส้อักเสบจากเลือดออกในมนุษย์ โดยมีสายพันธุ์ O157:H7 เป็นสายพันธุ์ที่เป็นตัวแทนมากที่สุด ในการติดเชื้อที่เกิดจากอาหาร แหล่งที่มาของการปนเปื้อน ได้แก่ เนื้อวัว นมดิบ สัตว์ปีกและผลิตภัณฑ์จากสัตว์ปีก รวมถึงผักและผลไม้ โดยเนื้อวัวเป็นพาหนะหลักในการแพร่เชื้อ

ผลิตภัณฑ์นี้เป็นน้ำยา PCR แบบเรียลไทม์แบบแห้งเยือกแข็ง สำหรับการ ตรวจหา Escherichia coli ลบ35 ใช้ rfbE gene ที่มีความอนุรักษ์สูงของ Escherichia coli ลบ เป็นเป้าหมายในการตรวจจับ เป็นมาสเตอร์มิกซ์ที่มีส่วนผสมที่จำเป็นทั้งหมด ยกเว้น DNA แม่แบบ และถูกเติมล่วงหน้าเป็นแบบทดสอบเดี่ยวในหลอด PCR เพื่อความสะดวกในการใช้งาน ผลิตภัณฑ์นี้ไม่จำเป็นต้องใช้ห่วงโซ่ความเย็นในการขนส่งและจัดเก็บ ซึ่งช่วยลดต้นทุนการขนส่งได้อย่างมาก และกำจัดความเป็นไปได้ในการสูญเสียจากการสิ้นเปลืองน้ำยาและการปนเปื้อนของละอองลอย

2. ข้อมูลจำเพาะและองค์ประกอบ

3. การจัดเก็บ และอายุการเก็บรักษา

จัดเก็บ ที่อุณหภูมิห้อง (5-3010 วินาที. หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณ35 มีความเสถียรนานถึง 12 เดือน35 เมื่อเปิดบรรจุภัณฑ์สุญญากาศแล้ว โปรดเก็บผลิตภัณฑ์ที่ไม่ได้ใช้ในถุงพลาสติกที่ปิดผนึกได้พร้อมสารดูดความชื้น และ ในถุงฟอยล์อลูมิเนียม 

ข้อควรระวัง: 

เม็ดน้ำยาที่เล็กลงเป็นตัวบ่งชี้ว่าความชื้นซึมเข้าไปในหลอดและน้ำยาเปียกชื้น น้ำยาใดๆ ที่มีขนาดเม็ดเล็กกว่าปกติอย่างมีนัยสำคัญควรถูกทิ้งหรือทดสอบด้วยการควบคุมเชิงบวกก่อนใช้งาน สำหรับการทดสอบตัวอย่าง.   

4. อุปกรณ์และน้ำยาเพิ่มเติมที่จำเป็น

การสกัดเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกปิเปต และทิป3) 

PCR แบบเรียลไทม์ -น้ำปราศจาก4) 

การตั้งค่า RT-PCR5. ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ที่เข้ากันได้

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.35

อาหารที่เสริมฤทธิ์, อาเจียน, ตัวอย่างอุจจาระร่วง ฯลฯ

7. ขั้นตอนการดำเนินงาน

1) 

การสกัดAnalysis Extractionสกัด

DNA จากตัวอย่างโดยใช้ชุดสกัดที่เหมาะสม แนะนำให้ DNA ถูกชะด้วยบัฟเฟอร์การชะประมาณ 100μl (ตัดจำนวนหลอดตามต้องการหรือ  H ปราศจากนิวคลีเอส2_O, ). หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณสกัด. ควร2) 

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกการควบคุมเชิงบวกสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนการคืนสภาพ

นานถึง 12 เดือน . ควร คืนสภาพก่อนใช้งาน โดยการเติม 250 μl ของบัฟเฟอร์ TE หรือ nuclease-free H2_O, ปั่นด้วยเครื่องปั่นเหวี่ยงที่ความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที และปั่นเหวี่ยงที่ความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที ใช้ทันทีหรือเก็บ ที่ -20°C10 วินาที35

PCR แบบเรียลไทม์ Mix PreparationA) เปิดบรรจุภัณฑ์สุญญากาศและนำแถบ 8 หลอดออกมา

s ที่มีน้ำยา ตรวจสอบว่าเม็ดอยู่ที่ก้นหลอด( ตัดจำนวนหลอดตามต้องการถ้า  จำเป็น). หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณB) เปิดหลอดและทิ้งฝา (ไม่เหมาะสำหรับเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์) และเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาบนน้ำแข็งดังนี้

ส่วนประกอบ

C)

ปิด PCR โดยใช้ฝา (แถบ) ที่เหมาะสมสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์(ไม่ได้ให้มา)D) ปั่นหลอดด้วยเครื่องปั่นเหวี่ยงที่ความเร็วต่ำเป็นเวลา 10~15 วินาที และปั่นเหวี่ยงที่ 3000rpm เป็นเวลา 20 วินาที แล้ววางลงในเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

4) 

การตั้งค่า RT-PCRตั้งค่าปริมาณปฏิกิริยาเป็น 25μl และขั้นตอนการขยาย PCR ดังนี้ รวบรวม FAM

การเรืองแสงที่ 60°C และเลือก NONE เป็นการอ้างอิงแบบพาสซีฟ ขั้นตอน

ผลลัพธ์ Analysis และ Interpretation