สารปฏิกิริยาการตรวจหา PCR ในเวลาจริงที่แห้งแบบเย็น เพื่อตรวจหา Listeria monocytogenes ที่มีความรู้สึกสูง โดยไม่จําเป็นต้องใช้โซ่เย็น

LyoDt^® น้ำยาตรวจวัด PCR แบบเรียลไทม์แบบแห้งเยือกแข็ง สำหรับ Listeria monocytogenes

การใช้งาน’s คู่มือ

1. คำอธิบาย

Listeria monocytogenes, แบคทีเรียแกรมบวกขนาดเล็ก เป็นเชื้อก่อโรคจากสัตว์สู่คน ซึ่งส่วนใหญ่แพร่กระจายผ่านทางช่องปากและทวารหนัก นอกจากนี้ยังสามารถเข้าสู่ร่างกายผ่านการสัมผัสทางตาหรือผิวหนัง/เยื่อเมือกที่แตก เชื้อจะแสดงอาการเป็นการติดเชื้อในกระแสเลือด เยื่อหุ้มสมองอักเสบ และภาวะเม็ดเลือดขาวชนิดโมโนไซต์สูง

ผลิตภัณฑ์นี้เป็นน้ำยาตรวจวัด PCR แบบเรียลไทม์แบบแห้งเยือกแข็ง สำหรับ การตรวจหา Listeria monocytogenes35 ใช้ hlyA ยีนที่อนุรักษ์ไว้สูงของ Listeria monocytogenes เป็นเป้าหมายในการตรวจวัด เป็นมาสเตอร์มิกซ์ที่มีส่วนผสมที่จำเป็นทั้งหมด ยกเว้นแม่แบบ DNA และถูกจ่ายล่วงหน้าเป็นแบบทดสอบเดี่ยวในหลอด PCR เพื่อความสะดวกในการใช้งาน ผลิตภัณฑ์นี้ไม่จำเป็นต้องใช้ห่วงโซ่ความเย็นในการขนส่งและจัดเก็บ ซึ่งช่วยลดต้นทุนการขนส่งได้อย่างมาก และกำจัดความเป็นไปได้ในการสูญเสียจากการสิ้นเปลืองน้ำยาและการปนเปื้อนของละอองลอย

2. ข้อมูลจำเพาะและองค์ประกอบ

3. การจัดเก็บ และอายุการเก็บรักษา

จัดเก็บ ที่อุณหภูมิห้อง (5-3010 วินาที. หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณ35 มีความเสถียรนานถึง 12 เดือน35 เมื่อเปิดบรรจุภัณฑ์สุญญากาศแล้ว โปรดเก็บผลิตภัณฑ์ที่ไม่ได้ใช้ในถุงพลาสติกปิดผนึกได้ที่ให้มาพร้อมกับสารดูดความชื้น และ ในถุงฟอยล์อลูมิเนียม 

ข้อควรระวัง: 

เม็ดน้ำยาที่เล็กลงเป็นสัญญาณบ่งชี้ว่าความชื้นซึมเข้าไปในหลอดและน้ำยาเปียกชื้น น้ำยาใดๆ ที่มีขนาดเม็ดเล็กกว่าปกติอย่างมีนัยสำคัญควรถูกทิ้งหรือทดสอบด้วยการควบคุมเชิงบวกก่อนใช้งาน สำหรับการทดสอบตัวอย่าง.   

4. อุปกรณ์และน้ำยาเพิ่มเติมที่จำเป็น

นิวคลีอิก เครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกปิเปต และทิป3) 

PCR แบบเรียลไทม์ -น้ำปราศจาก4) 

การตั้งค่า RT-PCR5. ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ที่เข้ากันได้

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.35

น้ำซุปเสริมอาหาร อาเจียน ตัวอย่างอุจจาระร่วง ฯลฯ

7. ขั้นตอนการดำเนินการ

1) 

นิวคลีอิก Aการวิเคราะห์ Extractionสกัด

DNA จากตัวอย่างโดยใช้ชุดสกัดที่เหมาะสม แนะนำให้ DNA ถูกชะด้วยบัฟเฟอร์การชะประมาณ 100μl (ตัดจำนวนหลอดตามต้องการหรือ  H ปราศจากนิวคลีเอส2_O, ). หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณการสกัด. มัน2) 

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกการควบคุมเชิงบวกสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนการคืนสภาพ

นานถึง 12 เดือน . มัน ควรจะถูกคืนสภาพก่อนใช้งาน โดยการเพิ่ม 250 μl ของบัฟเฟอร์ TE หรือ nuclease-free H2_O, ปั่นด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที และปั่นเหวี่ยงด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที ใช้ทันทีหรือเก็บ ที่ -20°C10 วินาที35

PCR แบบเรียลไทม์ Mix PreparationA) เปิดบรรจุภัณฑ์สุญญากาศและนำแถบ 8 หลอดออกมา

s ที่มีน้ำยา ตรวจสอบว่าเม็ดอยู่ที่ก้นหลอด( ตัดจำนวนหลอดตามต้องการถ้า  จำเป็น). หากหลอดที่ให้มาไม่เข้ากันกับเครื่องมือของคุณ ให้ถ่ายโอนเม็ดน้ำยาไปยังหลอดออปติคัลที่เข้ากันได้กับเครื่องมือของคุณB) เปิดหลอดและทิ้งฝา (ไม่เหมาะสำหรับเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์) และเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาบนน้ำแข็งดังนี้

ส่วนประกอบ

C)

ปิด PCR โดยใช้ฝา (แถบ) ที่เหมาะสมสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์(ไม่ได้ให้มา)D) ปั่นหลอดด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 10~15 วินาที และปั่นเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 วินาที และวางไว้ในเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

4) 

การตั้งค่า RT-PCRตั้งค่าปริมาณปฏิกิริยาเป็น 25μl และขั้นตอนการขยาย PCR ดังนี้ รวบรวม FAM

การเรืองแสงที่ 60°C และเลือก NONE เป็นการอ้างอิงแบบพาสซีฟ ขั้นตอน

ผลลัพธ์ Aการวิเคราะห์ และ Interpretation