LyoDt® เครื่องปฏิกิริยาตรวจสอบ PCR ระยะเวลาจริงที่แห้งแบบเย็นสําหรับ Vibrio cholerae O1/O139 - ไม่จําเป็นต้องใช้โซ่เย็นและมีการตรวจสอบครั้งเดียวก่อน

LyoDt^® ชุดตรวจ PCR แบบ Real-Time แบบแห้งเยือกแข็ง สำหรับ Vibrio cholerae O1/O139

การใช้งาน’s คู่มือ

1. คำอธิบาย

Vibrio cholerae เป็นแบคทีเรียแกรมลบที่ก่อให้เกิดโรคอหิวาตกโรค ซึ่งเป็นโรคติดเชื้อในลำไส้เฉียบพลันที่มีลักษณะเฉพาะคือการเริ่มต้นอย่างรวดเร็ว การแพร่เชื้อสูง และอัตราการเสียชีวิตที่สำคัญ ในฐานะที่เป็นโรคที่ต้องกักกันภายใต้ข้อบังคับด้านสุขภาพระหว่างประเทศ โดยส่วนใหญ่รวมถึงซีโรกรุ๊ป O1 และ O13935 

ผลิตภัณฑ์นี้เป็นน้ำยา PCR แบบเรียลไทม์แบบแห้งเยือกแข็งสำหรับการ ตรวจหาVibrio cholerae O1/O1ลบ35 ใช้ rfb ยีนที่อนุรักษ์ไว้สูงของVibrio cholerae O1/O1ลบ เป็นเป้าหมายการตรวจจับ เป็นมาสเตอร์มิกซ์ที่มีส่วนผสมที่จำเป็นทั้งหมด ยกเว้นแม่แบบ DNA และมีการจ่ายล่วงหน้าเป็นแบบทดสอบเดี่ยวในหลอด PCR เพื่อให้ใช้งานง่าย ผลิตภัณฑ์นี้ไม่จำเป็นต้องใช้ห่วงโซ่ความเย็นสำหรับการขนส่งและการจัดเก็บ ซึ่งช่วยลดต้นทุนการขนส่งได้อย่างมาก และกำจัดความเป็นไปได้ในการสูญเสียจากการสิ้นเปลืองน้ำยาและการปนเปื้อนของละอองลอย

2. ข้อมูลจำเพาะและองค์ประกอบ

3. การจัดเก็บ และอายุการเก็บรักษา

เก็บ ที่อุณหภูมิห้อง (5-3010 วินาที  35 มีความเสถียรนานถึง 12 เดือน35 เมื่อเปิดบรรจุภัณฑ์สูญญากาศแล้ว โปรดเก็บผลิตภัณฑ์ที่ไม่ได้ใช้ในถุงพลาสติกที่ปิดผนึกได้พร้อมสารดูดความชื้นและ ในถุงฟอยล์อลูมิเนียม 

ข้อควรระวัง: 

เม็ดน้ำยาที่เล็กลงเป็นสัญญาณบ่งบอกถึงความชื้นที่ซึมเข้าไปในหลอดและน้ำยาเปียกชื้น น้ำยาใดๆ ที่มีขนาดเม็ดเล็กกว่าปกติอย่างมากควรถูกทิ้งหรือทดสอบด้วยการควบคุมเชิงบวกก่อนใช้งาน สำหรับการทดสอบตัวอย่าง.   

4. อุปกรณ์และน้ำยาเพิ่มเติมที่จำเป็น

นิวคลีอิกเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกปิเปต และทิป3) 

PCR แบบเรียลไทม์ -น้ำปราศจาก4) 

การตั้งค่า RT-PCR5. ระบบ PCR แบบเรียลไทม์ที่เข้ากันได้

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.35

อาหารเสริมน้ำซุป

,ฯลฯ 7. ขั้นตอนการดำเนินงาน

1) 

นิวคลีอิกAnalysis Extractionสกัด

DNA จากตัวอย่างโดยใช้ชุดสกัดที่เหมาะสมแนะนำให้DNA ถูกชะด้วยบัฟเฟอร์การชะประมาณ 100μl(ตัดจำนวนหลอดตามต้องการหรือ  H ปราศจากนิวคลีเอส2_O, )  การสกัด. มัน2) 

การเตรียมการควบคุมเชิงบวกการควบคุมเชิงบวกสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนการคืนสภาพ

นานถึง 12 เดือน . มัน ควรจะถูกคืนสภาพก่อนใช้งานโดยการเพิ่ม250 μl ของบัฟเฟอร์ TE หรือ nuclease-free H2_O, ปั่นด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที และปั่นเหวี่ยงด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 15-20 วินาที ใช้ทันทีหรือเก็บ ที่ -20°C10 วินาที35

PCR แบบเรียลไทม์ Mix PreparationA) เปิดบรรจุภัณฑ์สูญญากาศและนำแถบ 8 หลอดออกมา

s ที่มีน้ำยา ตรวจสอบว่าเม็ดอยู่ที่ก้นหลอด( ตัดจำนวนหลอดตามต้องการถ้า  จำเป็น)  B) เปิดหลอดและทิ้งฝา(s) (ไม่เหมาะสำหรับเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์) และเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยาบนน้ำแข็งดังนี้

ส่วนประกอบ

C)

ปิด PCR โดยใช้ฝา (แถบ) ที่เหมาะสมสำหรับ PCR แบบเรียลไทม์(ไม่ได้ให้มา)D) ปั่นหลอดด้วยความเร็วต่ำเป็นเวลา 10~15 วินาที และปั่นเหวี่ยงที่ 3000rpm เป็นเวลา 20 วินาที แล้ววางลงในเครื่อง PCR แบบเรียลไทม์

4) 

การตั้งค่า RT-PCRตั้งค่าปริมาณปฏิกิริยาเป็น 25μl และขั้นตอนการขยาย PCR ดังนี้ รวบรวม FAM

 (สำหรับ O13939JOE (สำหรับ O139)  แม่แบบขั้นตอน

ผลลัพธ์ Analysis และ Interpretation